分光光度计物质在光的照射激发下，产生了对光吸收的效应，物质对光的吸收是具有选择性的，各种不同的物质都是具有其各自的吸收光谱，因此当某单色光通过溶液时，其能量就会被吸收而减弱，光能量减弱的程度和物质的浓度有一定的比例关系，也即符合于比色原理比耳定律。
1.入射光波长的选择
应根据吸收光谱曲线，选择溶液具有最大吸收时的波长作为入射光的波长。
如显色剂与钴络合物在420nm波长处均有最大吸收峰。如用此波长测定钴，则未反应的显色剂会造成干扰而降低测定的准确度。
2.参比溶液的选择
1）如果显色剂或其他试剂略有吸收，应用空白溶液（不加试样的溶液）作参比溶液。
2）如果仅待测物与显色剂的反应产物有吸收，可用纯溶剂作参比溶液。
3）如试样中其他组分有吸收，但不与显色剂反应，则当显色剂无吸收时，可用试样溶液作参比溶液，当显色剂略有吸收时，可在试液中加入适当掩蔽剂将待测组分掩蔽后再加显色剂，以此溶液作参比溶液。
3.吸光度读数范围的选择
实践证明，吸光度在0.2-0.5内时，测量的相对误差最小。
可用两种方法来调整被测溶液的吸光度：
1）控制被测溶液的浓度。如改变取样量，改变溶液的浓缩倍数或稀释倍数。
2）选择不同的比色皿。吸光度小的溶液要用光程长的比色皿，吸光度大的溶液要用光程短的比色皿。
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